為因應豬環(huán)狀病毒感染癥不活化疫苗檢驗方法的發(fā)展,于效力試驗增列抗體力價(jià)試驗方式,2015年6月26日,臺灣地區“行政院農業(yè)委員會(huì )”發(fā)布農防字第1041472784號令,修正“動(dòng)物用藥品檢驗標準”第一百八十二條之六。如下:
第一百八十二條之六 被檢豬環(huán)狀病毒感染癥不活化疫苗須符合下列條件:
一、特性試驗:須具固有理學(xué)性狀,且無(wú)異物及異常氣味。
二、無(wú)菌試驗:不得含有任何可能檢出之活菌。
三、防腐劑含有量試驗:甲醛(Formaldehyde)含有量須為0.2%以下,硫柳汞(Thimerosal)須為0.01%以下。
四、安全試驗:
(一) 小鼠:選用十三公克至十五公克健康小鼠五只,皮下注射十分之一劑量,接種后觀(guān)察十四天,不得有任何不良反應而健存。
(二) 天竺鼠:選用二百五十公克至三百公克健康天竺鼠三只,皮下注射一劑量,接種后觀(guān)察十四天,不得有任何不良反應而健存。
(三) 豬:選用三周齡至四周齡無(wú)特定病原(Specific pathogen free;SPF)小豬三頭,取二頭以肌肉注射本疫苗二劑量,另一頭為對照組,接種后觀(guān)察二十一天,均須無(wú)任何不良反應而健存。
五、效力試驗:依下列方法擇一試驗:
(一) 抗原相對效價(jià)試驗:試驗方法依原廠(chǎng)提供ELISA抗原和程序制備測試盤(pán),并依原廠(chǎng)提供之試劑、抗體、陰性對照品、陽(yáng)性對照品與標準抗原進(jìn)行測試,測試后之吸光值以Relpot 4.0軟件(U.S. Department of Agriculture, Center for Veterinary Biologics Program's Relative Potency Calculation Software, May 22, 2002)或最新版本軟件,計算RP值,RP值必須≧1。
(二) 血清相對效價(jià)試驗:選用三周齡至四周齡SPF雞只七只進(jìn)行試驗,免疫前先對雞只采血確定試驗雞只不具PCV2抗體。五只雞為免疫組,每只于腿部肌肉注射0.0125劑量。二只雞為控制組,四周后采血,依原廠(chǎng)提供的ELISA檢測套組以及方法進(jìn)行PCV2血清學(xué)檢測,并以原廠(chǎng)所提供的ELISA檢測試劑軟件計算抗體力價(jià),抗PCV2 ORF2抗原之ELISA平均抗體力價(jià)需大于24.5。
(三) 抗原含有量試驗:試驗方法依原廠(chǎng)提供ELISA試劑和程序制備測試盤(pán),依原廠(chǎng)提供之試劑與對照品進(jìn)行測試,并以原廠(chǎng)所提供的ELISA檢測試劑軟件計算疫苗抗原量,每劑量需大于102.1 ELISA單位。
(四) 抗體力價(jià)試驗:選用五周齡不具PCV2抗體小鼠十二只進(jìn)行試驗,隨機取六只為免疫組,每只于腹腔注射0.5毫升,另六只為對照組。于免疫前及免疫后三周采血并分離血清,依原廠(chǎng)提供之檢測套組進(jìn)行間接熒光抗體染色法(IFA)測定PCV2抗體力價(jià)。免疫后三周免疫組平均血清抗體力價(jià)需達八百倍以上,對照組血清抗體力價(jià)均需為陰性,且不得超過(guò)五十倍。
前項試驗確定困難時(shí),應予復檢。