近日，中國熱科院生物所熱帶作物病毒病害與防控研究團(tuán)隊聯(lián)合海南醫(yī)學(xué)院等單位開發(fā)了一套基于Nimble Cloning的標(biāo)準(zhǔn)化植物表達(dá)載體，為大規(guī)模的植物基因功能分析提供了一套高通量的載體工具，并為推動分子克隆領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)化的形成奠定了基礎(chǔ)。

 

　　Nimble Cloning（NC克隆）是中國熱科院生物所在前期研究中開發(fā)的新型分子克隆技術(shù)。在此基礎(chǔ)上，本研究繼續(xù)開發(fā)了一套基于Nimble Cloning的植物表達(dá)載體（pNC載體系統(tǒng)），具有Nimble Cloning的主要優(yōu)點：1. 操作簡單。目標(biāo)基因可以通過一步克隆反應(yīng)直接連接到載體，避免了載體的酶切、回收過程。2. 標(biāo)準(zhǔn)化。該套載體均具有NC克隆的通用接頭序列，目標(biāo)基因攜帶通用接頭后可克隆到該系統(tǒng)任一載體，解決了不同載體需要重新設(shè)計引物和擴(kuò)增基因的問題（圖1）。這兩個優(yōu)點使得pNC載體系統(tǒng)適合高通量的載體構(gòu)建。

 

　　該套載體工具由55個植物表達(dá)載體組成，涵蓋了多種常用的植物表達(dá)載體框架（植物T-DNA載體框架pCambia、pGreen和pBI121，以及植物瞬時表達(dá)載體框架）、抗性篩選基因（潮霉素、卡那霉素和除草劑抗性基因）和報告基因（GUS、GFP、CFP、RFP和mCherry）（圖2），具備在植物研究領(lǐng)域廣泛使用的基礎(chǔ)。該套載體均具有用于Nimble Cloning的NC克隆框，形成了一套標(biāo)準(zhǔn)化的載體系統(tǒng)，為植物功能基因組研究提供了一個標(biāo)準(zhǔn)化的分析平臺。

 

　　該研究成果以《A Nimble Cloning-compatible vector system for high-throughput gene functional analysis in plants》為題發(fā)表于《Plant Communications》。中國熱科院生物所青年研究員言普為論文第一作者；中國熱科院生物所青年研究員言普、研究員周鵬和海南醫(yī)學(xué)院副教授高新征為論文共同通訊作者。中國熱科院生物所和三亞研究院為第一完成單位。該研究得到海南省自然科學(xué)基金和中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項資助。

 

　　文章鏈接：https://doi.org/10.1016/j.xplc.2022.100471