河南大學(xué)國家食用菌加工技術(shù)研發(fā)專業(yè)中心在UPLC-MS/MS和成分敲除法研究靈芝免疫活性的譜效關(guān)系方面取得進(jìn)展。該成果以“Spectrum-effect relationship of immunologic activity of Ganoderma lucidum by UPLC-MS/MS and component knock-out method”為題發(fā)表在Food Science and Human Wellness （即時(shí)IF5.2307，JCR 2區(qū)）雜志。
靈芝為多孔菌科赤芝Ganoderma lucidum（Leyss. exFr.）Karst或紫芝Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang的干燥子實(shí)體，有兩千多年的藥用歷史。中國藥典記載：味甘，性平，歸心、肺、肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)氣安神，止咳平喘的功能。
本文主要研究靈芝調(diào)節(jié)免疫的活性成分，通過建立HPLC指紋圖譜和譜效關(guān)系模型，預(yù)測靈芝乙醇提取物中的活性化合物，然后利用成分敲出技術(shù)分離得到目標(biāo)化合物，通過高分辨質(zhì)譜對化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。建立BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型，進(jìn)行藥效預(yù)測。
利用PLSR方法建立靈芝的譜效關(guān)系，結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，P7、P8、P13、P14、P17、P22、P23、P26、P28、P31、P32、P33、P41和P45與靈芝提取物激活RAW264.7細(xì)胞、增強(qiáng)免疫活性呈正相關(guān)；峰P3、P34、P39和P43與靈芝提取物增強(qiáng)免疫活性呈負(fù)相關(guān)。通過高分辨質(zhì)譜法鑒定P14、P16、P18、P22、P24、P26、P28和P30為赤芝酸N、靈芝烯酸B、靈芝烯酸K、靈芝酸A、赤芝酸A、靈芝酸D、靈芝酸F和靈芝酸J。當(dāng)樣品的濃度相當(dāng)于原藥材200 μg/mL時(shí)，靈芝中同時(shí)存在激活和抑制RAW264.7細(xì)胞的化合物。以靈芝指紋圖譜共有峰峰面積和免疫藥效指標(biāo)為樣本訓(xùn)練BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，建立了靈芝譜效結(jié)合評價(jià)系統(tǒng)。所建BP網(wǎng)絡(luò)模型相關(guān)系數(shù)R為0.98643，藥效預(yù)測結(jié)果的誤差均在理想的范圍內(nèi)。
通過本研究，確定了赤芝酸N、靈芝酸A、靈芝酸D和靈芝酸F是靈芝子實(shí)體中的免疫增強(qiáng)作用活性化合物，可以作為靈芝的活性標(biāo)志物。
該方法的建立，以整體觀，快速鑒定靈芝中活性化合物，體現(xiàn)了中藥活性成分/群的多活性組分的作用。應(yīng)用該方法，我們已經(jīng)發(fā)表了系列文章，歡迎引用。
Food and Chemical Toxicology （https://doi.org/10.1016/j.fct.2019.110754）；
Food and Chemical Toxicology （https://doi.org/10.1016/j.fct.2021.112086）；
Food Science and Human Wellness （https://doi.org/10.1016/j.fshw.2021.02.019）；
International Journal of Molecular Sciences （https://doi.org/10.3390/ijms19113439）；
Frontiers in pharmacology（ https://doi.org/10.3389/fphar.2020.01342）；
Molecules （doi:10.3390/molecules22071231）
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