新疆野蘋(píng)果(Malus sieversii)是我國珍貴的第三紀孑遺植物,也是世界栽培蘋(píng)果(Malus domestica)的祖先種,具有豐富的抗性基因資源價(jià)值。近年來(lái),由于農田開(kāi)發(fā)、過(guò)度放牧、人為砍伐、蘋(píng)果小吉丁蟲(chóng)危害及腐爛病暴發(fā)等原因,新疆野蘋(píng)果種群面積急劇減少。新疆野蘋(píng)果保育及抗性基因資源挖掘利用迫在眉睫。由于新疆野蘋(píng)果的自交不親和性和較長(cháng)的幼齡期,常規的育種方法不易滿(mǎn)足需求,基于CRISPR/Cas9的基因編輯技術(shù)是現代育種的寵兒,已成功運用到多種植物中,但目前,國內外利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)創(chuàng )制新疆野蘋(píng)果新種質(zhì)及研究其基因功能幾乎為零。
針對上述問(wèn)題,中國科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研究所荒漠與綠洲生態(tài)國家重點(diǎn)實(shí)驗室張道遠研究組創(chuàng )制了新疆野蘋(píng)果組培體系,使得再生體系縮短至2~3個(gè)月,此方法可用于大批量擴繁新疆野蘋(píng)果克隆苗。相關(guān)研究成果以An efficient in vitro regeneration system from different wild apple (Malus sieversii) explants為題,發(fā)表在BMC Plant Methods上。
研究人員在獲得最優(yōu)野蘋(píng)果再生體系的基礎上,將基因編輯工具CRISPR/Cas9基因編輯體系應用于本物種,并取得良好的編輯效果。相關(guān)研究成果以Application of CRISPR/Cas9 Technology in Wild Apple (Malus sieverii) for gene editing為題,發(fā)表在BMC Plant Methods上。新疆野蘋(píng)果再生體系及遺傳轉化體系的建立將為基因功能研究、新種質(zhì)的創(chuàng )制奠定基礎,CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的成功應用也將加速新疆野蘋(píng)果的現代分子育種進(jìn)程。
圖1.新疆野蘋(píng)果愈傷組織再生體系
圖2.CRISPR/cas9載體構建過(guò)程、不同愈傷中突變的Sanger測序示例及陽(yáng)性愈傷組織