近日,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所植物病害生物防治創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)聯(lián)合德國馬普煤炭所、中國科學(xué)院等單位在國際知名期刊《美國化學(xué)會(huì)催化(ACS catalysis)》在線發(fā)表了題為“Biocatalytic Baeyer?Villiger Reactions: Uncovering the Source of Regioselectivity at Each Evolutionary Stage of a Mutant with Scrutiny of Fleeting Chiral Intermediates”的研究論文。該論文解析了微生物代謝途徑中Baeyer-Villiger單加氧酶的區(qū)域選擇性決定機(jī)制。
Baeyer-Villiger單加氧酶廣泛參與微生物代謝產(chǎn)物和天然產(chǎn)物的合成與降解過程,通過酶定向改造獲得性能優(yōu)良的突變體可提高目標(biāo)代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量,或改變目標(biāo)代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)提升其活性,是創(chuàng)制微生物代謝產(chǎn)物農(nóng)藥的重要技術(shù)手段之一。本團(tuán)隊(duì)前期通過定向改造方法成功反轉(zhuǎn)了Baeyer-Villiger單加氧酶TmCHMO對(duì)鏈?zhǔn)酵孜锏膮^(qū)域選擇性( J. Am. Chem. Soc. 2018, 140 , 10464-10472),然而決定其區(qū)域選擇性反轉(zhuǎn)的調(diào)控機(jī)制尚不清楚。
本論文解析了Baeyer-Villiger單加氧酶TmCHMO對(duì)鏈?zhǔn)酵孜?-苯基-2-丁酮的區(qū)域選擇性的控制機(jī)制。作者首先構(gòu)建了最優(yōu)突變體LGY3-D-E1中4個(gè)點(diǎn)突變的所有突變組合,并測定了這些突變體催化4-苯基-2-丁酮單加氧反應(yīng)的區(qū)域選擇性。隨后,系統(tǒng)分析了不同突變位點(diǎn)之間的協(xié)同和拮抗作用,從中選取了一條有利的路徑進(jìn)行深入解析。通過研究該路徑中突變體的晶體學(xué),成功解析了單突變L437T的晶體結(jié)構(gòu)。在此基礎(chǔ)上,采用量子化學(xué)計(jì)算的方法對(duì)最優(yōu)路徑中的野生酶及四個(gè)突變酶的反應(yīng)路徑和選擇性進(jìn)行了計(jì)算模擬,通過對(duì)生成不同產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的過渡態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,精確解析了區(qū)域選擇性的反轉(zhuǎn)機(jī)制。尤為值得關(guān)注的是,研究發(fā)現(xiàn)定向進(jìn)化路徑中的不同突變會(huì)影響Criegee過渡態(tài)中間體的立體構(gòu)型,進(jìn)而影響反應(yīng)的區(qū)域選擇性。該成果為Baeyer-Villiger單加氧酶的進(jìn)一步改進(jìn)和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ),推動(dòng)了該酶在微生物代謝產(chǎn)物農(nóng)藥研究中的應(yīng)用,具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。
中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所董義杰博士后(已出站)為本論文的共同第一作者(排名第一),李廣悅研究員為共同通訊作者。相關(guān)研究工作得到了中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程農(nóng)科英才項(xiàng)目和國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目的資助。
全文鏈接:https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acscatal.2c00415